• 紫外-可見分光光度法：紫外-可見分光光度法是在190～800nm波長范圍內(nèi)測定物質(zhì)的吸光度，用于鑒別、雜質(zhì)檢查和定量測定的方法。當(dāng)光穿過被測物質(zhì)溶液時，物質(zhì)對光的吸收程度隨光的波長不同而變化。

• 鉬銻抗比色法：在一定酸度和銻離子存在的情況下，磷酸根與鉬酸銨形成銻磷鉬混合雜多酸，它在常溫下可迅速被抗壞血酸還原為鉬藍(lán)，在700nm波長下測定。

離心管（10ml、25ml）、坩堝、燒杯、容量瓶、移液槍、分析天秤、pH計、振蕩器、烘箱、高速離心機(jī)、紫外分光光度計、高壓滅菌鍋、馬弗爐

使用桿持式淺水型柱狀底泥采樣器采取湖泊表層濕泥回實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行磷形態(tài)分析。

1、將坩堝編號并稱重記錄，取濕泥放入坩堝中，稱量濕泥與坩堝的總重量，放入烘箱60℃烘干，再次記錄其總重量，得出底泥含水率。

2、將烘干的泥研磨后過100目篩，裝入編號4號自封袋中。

烘干

過篩

3、取50ml離心管并編號，取過篩后樣品各0.4g放入離心管中，加入20ml 1 mol/L NH4Cl溶液（溶液1），放入搖床振蕩2h，用高速離心機(jī)3800r離心15min，取上清液過濾后測得弱結(jié)合態(tài)磷（LP），不用稀釋；（每步過后的提取液需要調(diào)節(jié)ph在6-8的范圍，ph過低，值會偏低甚至測不出來，ph高值會偏太大。）

4、在離心管中加入20mL純水，振蕩30min后3900r離心15min去除上清液，再加入20ml Na₂S₂O₄-NaHCO₃混合溶液（溶液2），振蕩30min，3900r離心15min取上清液過濾，測鐵結(jié)合態(tài)磷（Fe-P），稀釋倍數(shù)5~10倍；（溶液有臭雞蛋味，為反應(yīng)正常，沒有則要注意。沉淀過夜后，若上層有白色或者黃色懸浮物，需過濾完了在進(jìn)行測定。）

5、在離心管中加入20mL純水，振蕩30min后8000r離心5min去除上清液，再加入0.1 mol/L NaOH溶液（溶液3）20ml，振蕩16h后3900r離心15min，取上清液過濾，稀釋倍數(shù)0~5倍，直接測鋁結(jié)合態(tài)磷（Al-P）；取50ml比色管并貼標(biāo)簽編號，取上清液（稀釋倍數(shù)要和鋁結(jié)合態(tài)磷要一致），用純水稀釋至25ml標(biāo)線處，加入25ml氧化劑（溶液4）放入高壓滅菌鍋，120℃下滅菌30min后，測得總磷（TP）；有機(jī)磷（OP）含量是TP與Al-P差值，總磷的稀釋倍數(shù)要根據(jù)總體積50mL來反推所用的樣品；

震蕩

6、在離心管中加入20mL純水，振蕩30min后3900r離心15min去除上清液，再加入0.5 mol/L HCl溶液（溶液5）20ml，振蕩16h后3900r離心15min，取上清液過濾，上清液稀釋5~10倍后，直接測鈣結(jié)合態(tài)磷（Ca-P）；

7、在離心管中加入20mL去離子水，振蕩30min后3900r離心15min去除上清液，放入烘箱70℃烘干至脫離離心管壁（至少一天一夜），全部倒入編好號的坩堝中放入馬弗爐（坩堝的標(biāo)簽用橡皮擦掉，用鉛筆寫），550℃燒結(jié)2h（馬弗爐有一定的升溫時間，3h后手動關(guān)掉，開門降溫2h以上取出，避免燙傷）；樣品再次放回離心管中，如果燒過的樣品有結(jié)塊，用藥匙搗碎，加入1 mol/L HCl溶液（溶液6）20ml，振蕩16h后3900r離心15min，取上清液過濾，比色時加入同體積1mol/L NaOH至pH=7（同體積是與加入的不稀釋的樣品同體積），測得殘渣態(tài)磷（Res-P），稀釋5~10倍。

8、將上述所有需要比色的溶液取3ml，加入0.3ml鉬銻抗顯色劑（溶液7）振蕩均勻，顯色40min后在紫外分光光度計比色；

注：紫外分光光度計比色過程：打開UV.2.52軟件，再打開紫外分光光度計，進(jìn)行連接儀器，打開總磷或者磷酸根標(biāo)曲，將兩個比色皿洗凈加入去離子水放入比色槽，進(jìn)行自動較零后，開始樣品比色。

將測得數(shù)據(jù)導(dǎo)入EXCEL中，定量計算出各形態(tài)磷含量并整理出具報告。

數(shù)據(jù)導(dǎo)入

計算公式如下：

式中：

w-土壤中總磷的含量；A-試料的吸光度值；A0-空白試驗(yàn)的吸光度值；a-校準(zhǔn)曲線的截距；V₁-試樣定容體積；b-校準(zhǔn)曲線的斜率；m-試樣量；V₂-試料體積；W_dm-土壤干物質(zhì)的量。